生物学论文_猪塞尼卡谷病毒单克隆抗体的制备及

文章目录

1 材料与方法

1.1 材料

    1.1.1 毒株、质粒、细胞及试验动物

    1.1.2 主要试剂

1.2 方法

    1.2.1 SVV纯化与鉴定

    1.2.2 动物免疫

    1.2.3 间接ELISA检测方法的建立

    1.2.4 免疫小鼠血清效价检测

    1.2.5 细胞融合及亚克隆

    1.2.6 单克隆抗体Western blotting检测

    1.2.7 抗体亚型鉴定

    1.2.8 杂交瘤细胞染色体计数

    1.2.9 单克隆抗体的IFA鉴定

    1.2.10 单克隆抗体的病毒中和试验

    1.2.11 病毒吸附试验

    1.2.12 抗体相加试验

    1.2.13 小鼠腹水制备与纯化

    1.2.14 小鼠腹水效价的测定

    1.2.15 统计分析

2 结 果

2.1 SVV纯化与鉴定

2.2 免疫小鼠血清效价检测

2.3 阳性杂交瘤细胞筛选结果

2.4 单克隆抗体的Western blotting分析

2.5 单克隆抗体亚型鉴定

2.6 杂交瘤细胞染色体计数

2.7 单克隆抗体的IFA鉴定

2.8 单克隆抗体的病毒中和试验结果

2.9 病毒吸附试验结果

2.10 抗体相加试验结果

2.11 单克隆抗体腹水制备与纯化

2.12 小鼠腹水效价测定

3 讨 论

4 结 论

文章摘要:【目的】纯化猪塞尼卡谷病毒（Seneca Valley virus, SVV）SVV-CH-HB2016毒株,并制备其结构蛋白VP1、VP2和VP3的单克隆抗体。【方法】以蔗糖密度梯度离心法纯化的SVV-CH-HB2016病毒颗粒作为抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）进行细胞融合。通过间接免疫荧光试验（IFA）结合间接ELISA筛选阳性细胞株,制备能特异性分泌针对结构蛋白的杂交瘤细胞株。采用Western blotting和IFA方法分别检测单克隆抗体与重组表达蛋白及天然结构蛋白的反应性,并对单克隆抗体的病毒中和保护效果进行测定。利用空斑试验和实时荧光定量PCR方法探究中和性单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株吸附过程的影响,最后用抗体相加试验来分析14株单克隆抗体的抗原表位。【结果】在蔗糖密度梯度为5%～45%（W/V）时获得了纯度较好、浓度较高的SVV-CH-HB2016毒株结构蛋白,免疫小鼠血清抗体效价均达到了1∶12 800,成功制备了17株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经验证14株单克隆抗体能与重组结构蛋白发生Western blotting反应,17株单克隆抗体能与病毒发生IFA作用;2G6、4A3和4C11 3株单克隆抗体对SVV-CH-HB2016毒株感染的BHK-21细胞具有明显中和保护作用,也能有效抑制SVV-CH-HB2016毒株对293T细胞的吸附。经分析发现,除1F5与2E1、4B8与4F11外,其余10株单克隆抗体分别针对不同抗原表位。【结论】本研究初步建立了SVV的纯化方法,制备了17株特异性针对SVV-CH-HB2016毒株的单克隆抗体,为后期进一步开展SVV全病毒灭活疫苗的研发、ELISA检测方法的建立及保护性抗原表位的鉴定奠定了基础。

文章关键词:

项目基金:《微生物学免疫学进展》 网址: http://www.wswxmyxjz.cn/qikandaodu/2022/0112/474.html